INTERPRETACIÓN DE LAS TINCIONES Y RESULTADOS PREVISTOS:

El patrón de tinción celular de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY es membranoso y citoplasmático en el tejido de EOC, con distintas gamas de intensidad de la tinción. Únicamente se evalúa la tinción membranosa para la determinación del estado del FOLR1. El patrón de tinción de membrana puede ser apical o circunferencial (parcial o completo). El porcentaje de tinción de células tumorales en cada intensidad [negativa, débil (+1), moderada (+2), fuerte (+3)] se evaluará a partir de muestras que contengan un mínimo de aproximadamente 100 células tumorales viables. Sólo las intensidades de tinción moderadas y fuertes contribuirán a la determinación del estado de FOLR1 empleando el método de puntuación. Los casos de tejido de CEO se consideran positivos para el estado de FOLR1 si ≥ 75% de células tumorales (TC) viables muestran tinción de membrana moderada y/o fuerte. El porcentaje de tinción de FOLR1 para cada intensidad debe determinarlo un anatomopatólogo con la formación adecuada. El tejido de EOC debe evaluarse de acuerdo con el algoritmo de puntuación de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY, que se facilita en la Tabla 4. Consulte la guía de interpretación (P/N 1015089US) para obtener instrucciones adicionales e imágenes representativas.

Tabla 4. Algoritmo de puntuación VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY

* Relectura por parte de anatomopatólogos adicionales de la puntuación del FOLR1.

Para reducir la variabilidad de los resultados del FOLR1 para casos con un porcentaje de células tumorales próximo al umbral del 75% (entre el 65% y el 85%), se recomienda una relectura del portaobjetos por parte de un segundo anatomopatólogo. El resultado del caso con un % de TC entre 65% y 85% por parte de un anatomopatólogo debe adjudicarlo uno o dos anatomopatólogos independientes. El resultado final del paciente en lo referente a la tinción de FOLR1 (positivo y negativo) debe obtenerse mediante la regla de la mayoría o mediante consenso entre los anatomopatólogos.

RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS:

En caso de que algún problema no pueda atribuirse a ninguna de estas causas o la acción correctiva sugerida no consiga resolver el problema, diríjase a su representante local de asistencia técnica de Roche.

Tabla 18. Guía de resolución de problemas de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Tras la recepción del ensayo y cuando no se utilice, consérvese entre 2 y 8 °C. No lo congele.

Para garantizar una dispensación adecuada del reactivo y la estabilidad del anticuerpo, vuelva a poner el tapón del dispensador después de cada uso y almacene inmediatamente el dispensador en la nevera, en posición vertical.

Todos los dispensadores de anticuerpos tienen una fecha de caducidad. Si se almacena correctamente, el reactivo se mantendrá estable hasta la fecha indicada en la etiqueta. No usar el reactivo después de la fecha de caducidad.

MATERIAL SUMINISTRADO:

VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY contiene reactivo suficiente para 50 pruebas.

Un dispensador de 5 mL de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY contiene aproximadamente 28 µg de un anticuerpo monoclonal de ratón (FOLR1-2.1).

El anticuerpo se diluye en un tampón formado por Tris-HCL 0.05 M con una proteína transportadora y ProClin 300 al 0.10%, un conservante.

La concentración del anticuerpo específico es aproximadamente de 5.6 µg/mL.

No se ha observado ninguna reactividad del anticuerpo no específica conocida en este producto.

VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY utiliza un anticuerpo monoclonal de ratón producido como sobrenadante de un cultivo celular.

Consulte la hoja de datos del kit de detección VENTANA correspondiente para obtener descripciones detalladas de los siguientes aspectos: Principio del procedimiento, Material y métodos, Recogida y preparación de muestras para análisis, Procedimientos de control de calidad, Resolución de problemas, Interpretación de los resultados y Limitaciones.

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS:

No se suministran reactivos de tinción, como kits de detección VENTANA, ni componentes auxiliares, incluyendo portaobjetos de control de tejido negativos y positivos.

Puede que no todos los productos que aparecen en la hoja de datos estén disponibles en todos los lugares. Consulte al representante local de asistencia técnica de Roche.

No se suministran los reactivos y materiales siguientes, pero son necesarios:

1. Tejido de control recomendado.

2. Portaobjetos para microscopio con carga positiva.

3. Negative Control (Monoclonal) (n.º cat. 760-2014 / 05266670001).

4. Horno de secado capaz de mantener una temperatura de 60 °C ± 5 °C.

5. Etiquetas de código de barras.

6. Xileno (grado de histología).

7. Etanol o alcohol (grado de histología).

• Solución al 100%: Etanol o alcohol sin diluir.

• Solución al 95%: Mezcla de 95 partes de etanol o alcohol con 5 partes de agua desionizada.

• Solución al 80%: Mezcla de 80 partes de etanol o alcohol con 20 partes de agua desionizada.

8. Agua desionizada o destilada.

9. OptiView DAB IHC Detection Kit (n.º de cat. 760-700 / 06396500001).

10. EZ Prep Concentrate (10X) (n.º cat. 950-102 / 05279771001).

11. Reaction Buffer Concentrate (10X) (n.º cat. 950-300 / 05353955001).

12. ULTRA LCS (Predilute) (n.º cat. 650-210 / 05424534001).

13. ULTRA Cell Conditioning Solution (ULTRA CC1) (n.º cat. 950-224 / 05424569001).

14. Contratinción Hematoxylin II (n.º cat. 790-2208 / 05277965001).

15. Bluing Reagent (n.º de cat. 760-2037 / 05266769001).

16. Equipo de laboratorio de uso general.

17. Instrumento BenchMark ULTRA.

18. Medio de montaje permanente (Permount Fisher n.º de cat. SP15-500 o equivalente).

19. Cubreobjetos de cristal (suficiente para cubrir el tejido, como VWR, n.º de cat. 48393-060).

20. Montador automatizado (como Tissue-Tek SCA Automated Coverslipper).

21. Microscopía óptica.

22. Toallitas absorbentes.

CONTROL DE TEJIDO POSITIVO:

Se debe incluir un control tisular con cada sesión del instrumento. Esto contribuye a identificar los fallos que pueden surgir al aplicar los reactivos al portaobjetos durante la sesión de tinción. El tejido de control puede contener elementos de tinción tanto positiva como negativa y ambos sirven como control positivo y negativo. Consulte la Figura 2. El tejido de control debe ser una muestra de autopsia reciente, biopsia o cirugía preparada o fijada con la mayor brevedad con un proceso idéntico al de las secciones de prueba.

Los controles de tejido positivos conocidos sólo se deben usar para monitorizar el comportamiento correcto de los reactivos y los instrumentos, y no como ayuda para establecer un diagnóstico específico de las muestras de prueba. Si los controles de tejido positivos no muestran una tinción positiva, los resultados de las muestras de la prueba se deben considerar no válidos.

Un ejemplo de un tejido de control positivo y negativo para este anticuerpo es la trompa de Falopio normal. La expresión de FOLR1 está mucho más restringida a la superficie luminal de las células epiteliales de una trompa de Falopio normal. La tinción de FOLR1 en el tejido de una trompa de Falopio normal muestra una tinción de membrana en circunferencia, así como ausencia de tinción en el estroma. VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY requiere el uso de un caso de tinción circunferencial moderada como control de sesión positivo.

Tabla 3. Evaluación de tejidos de control positivo y negativo para una trompa de Falopio normal

* La tinción apical de la primera capa de las células luminales no debe tenerse en cuenta a la hora de evaluar la aceptabilidad de la tinción del FOLR1 de una trompa de Falopio normal.

Figura 2. Tinción aceptable de tejido de control de trompa de Falopio normal.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO:

Rendimiento de análisis:

Se realizaron pruebas de tinción para evaluar la sensibilidad, la especificidad y la precisión y los resultados se indican a continuación.

Sensibilidad y especificidad:

Se observó un estado positivo de FOLR1 en el 31.2% (68/218) de los casos en la cohorte de tejidos extirpados de CEO únicos en cuanto a prevalencia. Se observó un estado negativo de FOLR1 en el 68.8% (150/218) de los casos en la cohorte de tejidos extirpados de CEO únicos en cuanto a prevalencia. Además, se evaluó un array de tejidos neoplásicos para determinar la tinción de FOLR1 con VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) Assay.

Tabla 5. Especificidad de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY determinada analizando tejidos FFPE no neoplásicos

Tabla 6. Sensibilidad de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY determinada analizando tejidos FFPE neoplásicos

Precisión:

La precisión de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY en BenchMark ULTRA se evaluó en tres estudios de precisión: Estudio de precisión intermedia, estudio de precisión del lector (anatomopatólogo) y estudio de precisión (reproducibilidad) entre laboratorios y entre lectores.

Precisión intermedia:

Se incluyeron veinticuatro casos de tejido de CEO únicos (12 positivos para FOLR1 y 12 negativos para FOLR1) en el estudio de precisión intermedia. En el diseño del estudio para la evaluación de la precisión de tinción de tejidos de EOC con VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY se incluyó lo siguiente:

• 3 lotes de anticuerpo FOLR1.

• 3 instrumentos BenchMark ULTRA.

• 3 OptiView DAB IHC Detection Kits.

• Durante 3 días no consecutivos.

• 1 anatomopatólogo, 2 réplicas.

Todos los portaobjetos se enmascararon, se aleatorizaron y evaluaron a través del algoritmo de puntuación de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY para tejido de EOC. Cada caso tuvo 18 resultados y se asignó una mayoría de resultado del FOLR1 a partir de 18 resultados. Para cada caso, se calculó un % de TC mediano y un rango de % de TC de 18 resultados. Además, se calculó el porcentaje de resultados positivos (% de TC ≥ 75%, “Apto” en relación con la terapia dirigida contra FOLR1). Los resultados se resumen en las tablas que aparecen a continuación.

Tabla 7. Mediana y rango de porcentaje de TC en el estudio de precisión intermedia

Se evaluó la variabilidad de los valores porcentuales de TC para los 24 casos y se calcularon los siguientes componentes de precisión: repetibilidad (mismo anatomopatólogo) entre días, con distintos kits de anticuerpos, con distintos kits de detección, con distintos instrumentos y total. Los resultados se resumen en la tabla que aparece a continuación.

Tabla 8. Componentes de precisión en los casos del estudio de precisión intermedia

Además, se llevó a cabo un análisis cualitativo de los distintos componentes. Los resultados se resumen en la tabla que aparece a continuación.

Tabla 9. Precisión intermedia de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY en muestras de EOC

Nota: Porcentaje de concordancia positiva (PPA), porcentaje de concordancia negativa (NPA).

Porcentaje de concordancia global (OPA).

Estudio de precisión del lector:

En el estudio de precisión del lector de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY, se evaluaron los componentes de precisión «en un mismo lector» y «entre lectores» para lecturas de tejido de EOC. En el estudio se incluyeron 100 muestras de EOC únicas (50 con resultado de FOLR1 positivo y 50 con resultado de FOLR1 negativo) que se tiñeron con VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY. Las muestras se enmascararon y aleatorizaron antes de la evaluación para determinar el estado del FOLR1 a través del algoritmo de puntuación de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY para tejidos de EOC. En el estudio participaron 3 lectores (anatomopatólogos). Los lectores puntuaron todas las muestras dos veces, con un mínimo de dos semanas entre lecturas. Cada caso se sometió a 6 lecturas (2 lecturas por cada uno de los 3 lectores). Se evaluó la variabilidad de los valores porcentuales de TC para 100 casos y se calcularon los siguientes componentes de precisión: mismo lector, entre lectores y total. Los resultados se resumen en las tablas que aparecen a continuación.

Tabla 10. Componentes de precisión en los casos del estudio de precisión del lector

Además, se realizó un análisis cualitativo de distintos componentes de precisión. Los índices de concordancia obtenidos se recogen en la tabla que se incluye a continuación.

Tabla 11. Precisión con el mismo lector y con distintos lectores de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY en muestras de EOC

Nota: Promedio de concordancia positiva (APA), promedio de concordancia negativa (ANA) y porcentaje de concordancia global (OPA).

Estudio de reproducibilidad entre laboratorios:

El estudio de reproducibilidad entre laboratorios (ILR) de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY se llevó a cabo para evaluar la reproducibilidad de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY en BenchMark ULTRA. El estudio incluyó 28 muestras de CEO (14 positivas para FOLR1 y 14 negativas para FOLR1) usadas en tres instrumentos BenchMark ULTRA en cada uno de los 5 días no consecutivos en tres laboratorios externos. Cada uno de los 5 conjuntos de portaobjetos que se tiñeron por muestra y por día de tinción se aleatorizaron y se evaluaron posteriormente por parte de 6 lectores (2 lectores por sitio). Se obtuvieron 10 resultados por sitio en cada caso (30 resultados en total). Se evaluó el rendimiento y se calcularon los siguientes componentes de precisión: entre lectores, entre días, entre sitios y total. Los resultados se recogen en las tablas que aparecen a continuación.

Tabla 12. Componentes de precisión para casos en el estudio de reproducibilidad entre laboratorios

El rendimiento obtenido en 28 casos por 6 lectores se resume en la tabla que aparece a continuación.

Tabla 13. Porcentaje de resultados positivos y negativos de FOLR1 para distintos rangos de porcentaje de TC

Además, se realizó un análisis cualitativo de distintos componentes de precisión. Los resultados del análisis de 28 casos se resumen en la tabla siguiente.

Tabla 14. Reproducibilidad entre laboratorios de los índices de concordancia global de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY de muestras de CEO

Nota: Porcentaje de concordancia positiva (PPA), porcentaje de concordancia negativa (NPA) y porcentaje de concordancia global (OPA).

Los acuerdos globales se calcularon en función del modo de nivel del caso.

Los acuerdos del componente «mismo sitio» se calcularon en función del modo de nivel del caso del mismo sitio.

Los acuerdos del componente «mismo lector» se calcularon en función del modo de nivel del caso del mismo lector.

Además, se llevaron a cabo comparaciones por pares entre sitios, entre lectores y entre días del estado de FOLR1. Los datos de la siguiente tabla indican la reproducibilidad del ensayo en 5 días, 3 sitios y 6 lectores.

Tabla 15. Resultados adicionales de reproducibilidad externa por pares de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY de muestras de CEO

RENDIMIENTO CLÍNICO:

La eficacia de ELAHERE (mirvetuximab soravtansine) se investigó a través de un estudio con un solo grupo (estudio IMGN853-0417, NCT04296890) de pacientes con EOC de resultado positivo para FRα (FOLR1) y resistencia al platino (n = 104). Los pacientes recibieron entre 1 y 3 líneas previas de terapia, de las cuales al menos 1 contenía bevacizumab. Todos los pacientes recibieron ELAHERE (mirvetuximab soravtansine) 6 mg por cada kg de su peso ideal corporal ajustado (AIBW) mediante infusión intravenosa hasta la progresión clínica o hasta que la toxicidad ya no era aceptable. Los parámetros de medida principales de la eficacia en los resultados fueron la tasa de respuesta global (ORR, criterio de valoración primario) y la duración de la repuesta (DOR, criterio de valoración secundario) evaluados por los investigadores de acuerdo con los criterios RECIST (Criterios de Evaluación de Respuesta en Tumores Sólidos), versión 1.1 (v1.1). El criterio de valoración primario de ORR se calculó en función de la población de EE del investigador (n = 104).

La mediana de edad de los pacientes fue de 62 años (rango: entre 35 y 85 años), la mayoría eran blancos (96%) y todos los pacientes tenían una puntuación en la escala ECOG de 0 (57%) o 1 (43%). El 51% de los pacientes había recibido 3 pautas de terapia sistémica previamente. Todos los pacientes habían recibido previamente bevacizumab y el 47% habían recibido un inhibidor de PARP con anterioridad. La expresión tumoral de FRα positiva se definió mediante VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY. Los resultados de eficacia del estudio IMGN853-0417 se resumen a continuación.

Tabla 16. Resultados de eficacia del estudio IMGN853-0417

a Evaluación del investigador.

Los resultados de evaluación de respuesta mediante revisiones de radiología independientes fueron coherentes con los resultados de la evaluación del investigador.

Estudio de concordancia de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY sin SIR para IMGN853-0417:

La eficacia de ELAHERE (mirvetuximab soravtansine) se investigó en el estudio IMGN853-0417 en pacientes con EOC resistente al platino cuyos tumores dieron un resultado de FRα (FOLR1) positivo, según se determinó mediante VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY con un portaobjetos de referencia de intensidad de tinción (SIR). Se llevó a cabo un estudio puente para determinar los resultados de eficacia simulados de ORR y DOR evaluados por el investigador de acuerdo con los criterios RECIST v1.1 en pacientes con EOC resistente al platino que podrían haber participado en el estudio IMGN853-0417 si se hubiera utilizado VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY sin portaobjetos de SIR para determinar la inclusión en el estudio en lugar de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY con portaobjetos de SIR.

Se llevó a cabo un análisis de concordancia para evaluar la similitud del estado del FOLR1 en la población de pacientes del IMGN853-0417 según VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY sin portaobjetos de SIR frente a los resultados con portaobjetos de SIR como referencia comparativa. Los resultados de concordancia extraídos de los resultados evaluables de todas las muestras clínicas del estudio IMGN853-0417 original según VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY, tanto con portaobjetos de SIR como sin él, se muestran en la Tabla 17.

Tabla 17. Concordancia del estado de FOLR1 entre lecturas sin portaobjetos de SIR en comparación con lecturas con portaobjetos de SIR como comparador

CI = intervalo de confianza; NPA = porcentaje de concordancia negativa; OPA = porcentaje de concordancia global; PPA = porcentaje de concordancia positiva

Se llevaron a cabo análisis adicionales para simular los resultados de eficacia de los datos clínicos de 10 pacientes con EOC resistente al platino cuyos tumores habrían dado un resultado del FOLR1 positivo de haberse llevado a cabo las pruebas de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY sin portaobjetos de SIR mediante un enfoque de imputación múltiple (MI). Las estimaciones de punto para la ORR (la mediana de MI es del 33.0%) y la DOR (la mediana de MI es de 5.9) en el conjunto de datos que incluía los resultados de eficacia imputados fueron comparables a los resultados del estudio IMGN853-0417 original, lo que indica que pueden esperarse resultados clínicos casi idénticos se use o no el portaobjetos de SIR como ayuda en la interpretación de los portaobjetos teñidos con VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY.

USO PREVISTO:

Figura 1. Tejido de carcinoma ovárico teñido con VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY.

VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY es un ensayo inmunohistoquímico cualitativo que utiliza anticuerpo anti-FOLR1 monoclonal de ratón, clon FOLR1-2.1; está destinado a su uso en laboratorio para determinar la proteína receptora de folato alfa (FOLR1) en muestras de tejido de cáncer epitelial de ovario, de trompas de Falopio y primario de peritoneo fijado con formol y embebido en parafina mediante microscopía óptica. Este ensayo está destinado a su uso con OptiView DAB IHC.

Detection Kit para llevar a cabo la tinción con un instrumento BenchMark ULTRA.

La línea de corte clínica de la expresión de FOLR1 es ≥ 75% de células tumorales (TC) viables con tinción de membrana, con niveles de intensidad moderada y/o fuerte.

Este ensayo está indicado como ayuda en la identificación de pacientes con cáncer epitelial de ovario, de trompas de Falopio y primario de peritoneo que pueden cumplir los criterios de idoneidad para recibir un tratamiento con ELAHERE (mirvetuximab soravtansine).

La interpretación de los resultados de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY debe llevarla a cabo un anatomopatólogo cualificado junto con un examen histológico, la información clínica pertinente y los controles adecuados.

Este producto está destinado para uso diagnóstico in vitro (IVD).

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES:

1. Para uso diagnóstico in vitro (IVD).

2. Sólo para uso profesional.

3. No utilizar por encima del número especificado de ensayos.

4. La solución ProClin 300 se utiliza como conservante en este reactivo. Está clasificada como irritante y puede ocasionar sensibilización por contacto con la piel. Adopte precauciones razonables cuando la manipule. Evite el contacto de los reactivos con los ojos, la piel y las membranas mucosas. Utilice guantes y ropa de protección.

5. Los portaobjetos con carga positiva pueden verse afectados por presiones ambientales, dando lugar a una tinción incorrecta. Póngase en contacto con su representante de servicio de Roche para obtener más información sobre el uso de este tipo de portaobjetos.

6. Los materiales de origen animal o humano deben manipularse como materiales biopeligrosos y eliminarse con las precauciones adecuadas. En caso de exposición, deberán seguirse las directivas sanitarias de las autoridades responsables.2,3

7. Evite el contacto de los reactivos con los ojos y las membranas mucosas. Si los reactivos entran en contacto con zonas sensibles, lávelas con agua abundante.

8. Evite la contaminación microbiana de los reactivos, dado que podría dar lugar a resultados incorrectos.

9. Para obtener más información sobre el uso de este dispositivo, consulte el Manual del usuario del instrumento BenchMark ULTRA y las instrucciones de uso de todos los componentes necesarios que puede encontrar en navifyportal.roche.com.

10. Consultar a las autoridades locales y/o estatales sobre el método de eliminación recomendado.

11. El etiquetado de seguridad de los productos sigue principalmente las directrices del SGA de la UE. Está disponible bajo petición la hoja de datos de seguridad para los usuarios profesionales.

12. Para comunicar la sospecha de incidentes graves relacionados con este dispositivo, póngase en contacto con su representante local de servicio Roche y con las autoridades competentes del Estado o País Miembro de residencia del usuario.

Este producto contiene componentes clasificados como sigue de conformidad con el Reglamento (CE) n.º 1272/2008:

Tabla 1. Información de riesgos

Este producto contiene CAS n.º 55965-84-9, masa reactiva de: 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona y 2-metil-2H-isotiazol-3-ona (3:1).

LIMITACIONES ESPECÍFICAS:

Este anticuerpo muestra las siguientes limitaciones específicas:

1. VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY se ha optimizado en el instrumento BenchMark ULTRA junto con el OptiView DAB IHC Detection Kit con un tiempo de incubación del anticuerpo primario de 32 minutos. Tiempos de incubación y temperaturas diferentes a los especificados pueden dar lugar a la obtención de resultados erróneos.

2. Cualquier diferencia en la forma de llevar a cabo los procedimientos de prueba recomendados puede invalidar los resultados de la prueba. Los usuarios que no sigan los procedimientos de prueba recomendados que se muestran en la Tabla 2 son responsables de la validación de cualquier modificación.

3. La inmunohistoquímica es un proceso de diagnóstico que comprende varios pasos y requiere una formación especializada en cuanto a la correcta elección de los tejidos y los reactivos, la fijación, el procesamiento, la preparación de portaobjetos de inmunohistoquímica y la interpretación de los resultados de la tinción.

4. La tinción del tejido depende de la manipulación y el procesamiento del tejido antes de la tinción. Una fijación, congelación, descongelación, lavado, secado, calentamiento y seccionado incorrectos, o la contaminación con otros tejidos o líquidos puede provocar la aparición de artefactos, el enmascaramiento de anticuerpos o resultados incorrectos. La existencia de resultados incoherentes puede ser el resultado de la introducción de variaciones en los métodos de fijación e inclusión o puede derivarse de las irregularidades características del tejido.

5. Se evaluó la fijación durante un plazo de 6 a 72 en Neutral Buffered Formalin (NBF) al 10% en modelos representativos. En el caso de muestras pequeñas, como las biopsias, se recomienda un tiempo de fijación de 6 horas o más. En el caso de muestras de mayor grosor, como las resecciones, se recomienda una fijación de 12 horas o más.

6. El tejido del paciente se debe teñir en un plazo máximo de 45 días a partir del corte del bloque de tejido. Es posible que se observe una pérdida del rendimiento de la tinción en secciones que se hayan conservado a temperatura ambiente (15-25 °C) o a 5 °C (± 3 °C) durante más de 45 días.

Los portaobjetos se deben secar y conservar a temperatura ambiente. Dado que se ha confirmado que los factores medioambientales influyen en la estabilidad de los antígenos en los portaobjetos con cortes, los laboratorios deben validar la estabilidad de los cortes en los portaobjetos en su propio entorno cuando se almacenan durante un periodo superior a los 45 días.

Es posible que no todos los ensayos estén registrados en todos los instrumentos. Póngase en contacto con el representante local de servicio Roche para obtener más información.

PREPARACIÓN DE MUESTRAS:

Los tejidos fijados con formol y embebidos en parafina (FFPE) que se procesan de forma habitual resultan adecuados para su uso con este anticuerpo primario cuando se utilizan con los kits de detección de VENTANA y los instrumentos BenchMark ULTRA. El fijador de tejido recomendado es formol tamponado neutro (NBF) al 10% durante un plazo de 6 a 72 horas.1

Consulte también la sección «Limitaciones específicas» que aparece a continuación.

Con el uso de fijadores como el alcohol-formol-ácido acético (AFA), el alcohol al 95% y Prefer se ha observado una pérdida de expresión de la proteína FOLR1 específica en todos los tiempos de fijación probados (entre 1 y 72 horas), por lo que no se recomienda su uso con este ensayo. El uso de Zinc Formalin o Z-5 no se recomienda debido a la variabilidad en el porcentaje de tinción de células tumorales.

Se deben realizar cortes de 4 µm de grosor y colocarse en portaobjetos de vidrio cargados positivamente. Los portaobjetos deben teñirse inmediatamente, ya que la antigenicidad de los cortes de tejido puede disminuir con el tiempo. Solicite a su representante de servicio de Roche una copia de «Recommended Slide Storage and Handling» para obtener más información al respecto.

Se recomienda analizar controles positivos y negativos a la vez que las muestras desconocidas.

PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO:

VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY utiliza un anticuerpo primario monoclonal de ratón que se une a la proteína FOLR1 en secciones de tejido fijado con formol y embebido en parafina. El anticuerpo específico puede visualizarse mediante OptiView DAB IHC Detection Kit. Consulte la hoja de datos correspondiente de OptiView DAB IHC Detection Kit para obtener más información al respecto. Los resultados se interpretan mediante microscopía óptica.

Los casos clínicos deben evaluarse con un control tisular adecuado. Además de la tinción con el anticuerpo de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY, se debe teñir un segundo portaobjetos con VENTANA Negative Control (Monoclonal). Para que este portaobjetos se considere evaluable, debe ser negativo para la tinción específica.

PROCEDIMIENTO DE TINCIÓN:

Los anticuerpos primarios VENTANA se han desarrollado para su uso en instrumentos BenchMark ULTRA junto con los kits de detección de VENTANA y sus accesorios.

Consulte la Tabla 2 para ver los protocolos de tinción recomendados.

Este anticuerpo se ha optimizado para tiempos de incubación específicos, pero el usuario debe verificar los resultados obtenidos con este reactivo.

Los parámetros de los procedimientos automatizados se pueden visualizar, imprimir y editar según el procedimiento descrito en el Manual del usuario del instrumento. Consulte la hoja de datos del kit de detección VENTANA correspondiente para obtener más detalles sobre los procedimientos de tinción de inmunohistoquímica.

Para obtener más información sobre el uso adecuado de este dispositivo, consulte la hoja de datos del dispensador en línea asociada al P/N 740-5065.

Tabla 2. Protocolo de tinción recomendado para VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY junto con el OptiView DAB IHC Detection Kit en instrumentos BenchMark ULTRA

* Puede seleccionarlo el usuario

** El horneado es opcional. Puede llevarse a cabo en el instrumento o sin conexión.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN:

VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY utiliza un anticuerpo de hibridoma monoclonal de ratón producido contra una proteína recombinante como un sobrenadante de cultivo celular, y purificado con proteína G. El anticuerpo de VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RXDX ASSAY muestra tinción citoplasmática y membranosa. Sin embargo, sólo se evalúa la tinción de membrana para la determinación del estado de FOLR1.

REFERENCIAS:

1. Carson FL, Cappellano C. Histotechnology; A Self-Instructional Text, 5th edition. American Society for Clinical Pathology Press; 2020, 2022.

2. Occupational Safety and Health Standards: Occupational exposure to hazardous chemicals in laboratories. (29 CFR Part 1910.1450). Fed. Register.

3. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of 24 June 2020 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work.

Nota: En este documento se ha usado siempre el punto como separador decimal para marcar el borde entre la parte entera y la parte fraccionaria de los numerales con decimales. No se han usado separadores para las unidades de millar.

El resumen de los aspectos de seguridad y rendimiento se puede ver a continuación: https://ec.europa.eu/tools/eudamed

Símbolos:

Ventana usa los siguientes símbolos y signos además de los indicados en la norma ISO 15223-1 (para USA: consulte elabdoc.roche.com/symbols para obtener más información).

Propiedad intelectual:

VENTANA, BENCHMARK y OPTIVIEW son marcas comerciales de Roche. Todos los demás nombres de productos y marcas comerciales pertenecen a sus respectivos propietarios.

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